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標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng)要注意些什么?

更新時間:2022-07-19點擊次數(shù):784
  標(biāo)記細(xì)胞株是細(xì)胞系中特定標(biāo)簽(Luc、GFP、RFP等)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移,該細(xì)胞系可用作示蹤細(xì)胞,為細(xì)胞成像和體內(nèi)成像提供了很大的便利。
  
 

標(biāo)記細(xì)胞株
 

 

  標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng):
  
  1、在無菌條件下,取出1-3DSD大鼠的心房組織,然后用PBS清洗組織塊兩次,然后將組織切成1mm3左右;
  
  2、在組織塊中加入4ml酶消化液(0.1%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型膠原酶),懸停10s,37℃消化10min,然后用滴定管吹成單細(xì)胞懸液,自然沉淀收集取上清,用10%fbs培養(yǎng)基消化終止后置于4℃;
  
  3、剩余組織加入3~4ml酶消化液,懸停10s,37℃消化10min,按上述方法收集上清液,消化結(jié)束后置于4℃,重復(fù)此步驟2次-3次直到組織*消化;
  
  4、將細(xì)胞消化液用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾,1200r/min離心10min,棄上清,沉淀的細(xì)胞用10%fbsdmem/f12培養(yǎng)基懸浮,接種于25cm2燒瓶中培養(yǎng)37℃5%co2培養(yǎng)箱;
  
  5、差異粘附1h后,根據(jù)實驗需要吸出培養(yǎng)液接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。
  
  標(biāo)記細(xì)胞株使用注意事項:
  
  1、本方法使用懸浮細(xì)胞時,必須先離心后吸出上清液并加入DMSO。
  
  2、甲臜的形成不僅與活細(xì)胞數(shù)量成正比,還受作用時間的影響。因此,當(dāng)樣品較多時,測得的OD值可能會隨時間而變化。
  
  3、MTT溶液呈黃色,需要避光存放,長時間曝光會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時請勿使用。MTT溶液在4℃或更低溫度下會凝固。20-25℃水浴中孵育片刻至*溶解即可使用。
  
  4、為了您的安全和健康,請穿戴實驗室服和一次性手套。
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