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要根據(jù)實際情況選擇適合的細(xì)胞凋亡檢測方法

更新時間:2022-12-19點擊次數(shù):783
  細(xì)胞凋亡(apoptosis)是一種在多細(xì)胞生物體中發(fā)生的程序性細(xì)胞死亡形式,屬于細(xì)胞的正常生理過程,在生物體進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及發(fā)育過程中起著重要作用,具有重要生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機制。
  
  在生物學(xué)研究過程中常常需要檢測細(xì)胞凋亡情況。目前至少有十?dāng)?shù)種檢測細(xì)胞凋亡的方法,大致可分為基于細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標(biāo)記三大類。每一方法都有其優(yōu)缺點,需要根據(jù)實際情況選擇適合的細(xì)胞凋亡檢測方法。
 
  

細(xì)胞凋亡檢測

 
 

  1、電子顯微鏡檢測方法
  
  在透射電鏡下,凋亡細(xì)胞體積變小。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei),染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;凋亡晚期出現(xiàn)核解體,產(chǎn)生凋亡小體。
  
  2、細(xì)胞核形態(tài)染色法
  
  相比細(xì)胞凋亡的其他形態(tài)變化,利用熒光染料配合熒光顯微鏡對細(xì)胞核形態(tài)的觀察也是較為直接的指標(biāo)。常用的DNA特異性染料有:Hoechst、DAPI以及碘化丙啶(PI)。Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料;DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色;PI不能透過完整的細(xì)胞膜,但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI能夠透過細(xì)胞膜而將細(xì)胞核染紅。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來(Annexin-V/PI法)。
  
  3、線粒體膜電位檢測
  
  線粒體跨膜電位的下降也是凋亡細(xì)胞一個重要特點,是細(xì)胞凋亡過程中初期發(fā)生的事件(早于核形態(tài)的變化和PS的外翻)。一旦線粒體跨膜電位崩潰,細(xì)胞就會進(jìn)入不可逆的凋亡過程。一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、DiOC6、JC-1、TMRM等,在線粒體跨膜電位存在的情況下可結(jié)合到線粒體基質(zhì),通過熒光顯微鏡觀察其熒光的增強或減弱可反應(yīng)線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。
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