原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)是為了什么？

　　原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的嘗試，我們實(shí)驗(yàn)室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經(jīng)驗(yàn)?？偨Y(jié)如下：

　　1、細(xì)胞分散和接種均勻度

　　分離出來(lái)的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊，因此，在差動(dòng)貼壁前后，應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后，用滴管輕輕吹每個(gè)孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。

 

　　2、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類(lèi)型的選擇

　　成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間更容易貼壁，具有分裂和增殖的能力。差異粘附后，少量成纖維細(xì)胞仍混合在心肌細(xì)胞中。如果處理不當(dāng)，它們很容易長(zhǎng)成優(yōu)勢(shì)細(xì)胞溴脫氧尿苷（BrdU）會(huì)干擾細(xì)胞有絲分裂，因此BrdU通常用于抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，但如果使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，則很難BrdU*抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，因?yàn)樘ヅＱ逯泻性S多促有絲分裂因子，使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細(xì)胞。

　　3、換液時(shí)間

　　觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時(shí)，接種密度低，貼壁心肌細(xì)胞數(shù)減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細(xì)胞，接種后48小時(shí)應(yīng)更換溶液，這樣不僅貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量明顯增加，而且BrdU的作用時(shí)間更長(zhǎng)，對(duì)成纖維細(xì)胞的抑制作用更明確此外，其與0.1g?L1BSA對(duì)心肌細(xì)胞黏附率和凋亡率無(wú)顯著影響。

　　4、防污染措施

　　除無(wú)菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外，還應(yīng)特別注意以下幾點(diǎn)：（1）取心時(shí)避免切開(kāi)消化道較安全的方法是切入劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機(jī)會(huì)（2）條件允許的情況下，新生大鼠心肌細(xì)胞不應(yīng)與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)，以防止交叉污染（3）培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的觀察和拍照每次時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則不僅會(huì)改變培養(yǎng)基的pH值，還會(huì)增加污染的概率。