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C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法

更新時間:2022-07-14點擊次數(shù):1454
                   實驗方法


      1. 將實驗小鼠脫頸處死,75%乙醇浸泡5min,固定,備皮,取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。

      2. 仔細(xì)剝離脂肪,血管等多余組織,PBS清洗,加胰酶消化1h。

      3. 分離真表皮,去除表皮后,PBS清洗3次。

      4. 將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎,加入適量胰酶,轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi),37℃恒溫水浴消化1h。

      5. 消化結(jié)束后,加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應(yīng),1000rpm離心5min,棄上清。

      6. PBS清洗一遍,離心棄上清。

      7. 將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi),加入2ml*培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

     8. 第二天,補充培養(yǎng)基至5ml,繼續(xù)培養(yǎng),3-4天后有細(xì)胞游出。

     9. 7天后已有大量細(xì)胞游出,去除組織塊并換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


  • 實驗圖例

取材&分離

圖片111.png



細(xì)胞培養(yǎng)

22222圖片-11.jpg

圖片
END

 

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