細(xì)胞培養(yǎng)基介紹

細(xì)胞培養(yǎng)基的概念 01

細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)，它為動物細(xì)胞的健康快速成長提供營養(yǎng)物質(zhì)。所以，只要用到細(xì)胞進(jìn)行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢必少不了細(xì)胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補(bǔ)加血清、抗生素等成分。

細(xì)胞培養(yǎng)基的分類02

培養(yǎng)基主要有：天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。

天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們早期采用的細(xì)胞培養(yǎng)基，直接取自于動物組織提取液或體液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。營養(yǎng)價值高，但成分復(fù)雜，差異大、不穩(wěn)定，來源也受限制。水解乳蛋白和膠原是兩種較好的天然培養(yǎng)基，富含氨基酸。血清是天然培養(yǎng)基中有效和常用的培養(yǎng)基，但其組成成分復(fù)雜，其中一些成分與功能不明確。血清的來源有胎牛血清、小?；虺膳Ｑ濉ⅠR血清、雞血清、羊血清及人血清，*泛應(yīng)用的為胎牛血清和小牛血清。

合成細(xì)胞培養(yǎng)基是用化學(xué)成分明確的試劑配制的培養(yǎng)基，組分穩(wěn)定，主要包括糖類、必需氨基酸、維生素、無機(jī)鹽類等。1950年，Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M199培養(yǎng)基，可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞。1951年，Harry Eagle研發(fā)了動物細(xì)胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基，即必需培養(yǎng)基(MEM培養(yǎng)基)，是目前使用*泛的合成細(xì)胞培養(yǎng)基之一。合成細(xì)胞培養(yǎng)基發(fā)展至今已有幾十種，除了沿用半個世紀(jì)的基礎(chǔ)合成細(xì)胞培養(yǎng)基之外，近年來還出現(xiàn)了營養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基。

在細(xì)胞培養(yǎng)中，需要根據(jù)細(xì)胞種類和培養(yǎng)條件的不同選擇合適的合成細(xì)胞培養(yǎng)基。目前，在動物細(xì)胞培養(yǎng)中常用基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基有BME、MEM、DMEM、RPMI-1640、Ham F12、M199 等。由于天然培養(yǎng)基的一些營養(yǎng)成分不能被合成細(xì)胞培養(yǎng)基*代替，因此一般需在合成細(xì)胞培養(yǎng)基中添加5％～10％的胎牛血清。胎牛血清的加入對細(xì)胞培養(yǎng)非常有效，但胎牛血清的成分復(fù)雜，這對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、純化和檢測會帶來一定的不便，為減少胎牛血清的影響，開發(fā)了營養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基，可以將胎牛血清的使用量降低到1～3％。

無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serum free medium， SFM）是指在使用中無需添加血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，且其組成成分不含有任何動物組分。按照其組分分類，還可以分為無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基和化學(xué)限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基，前者組分中可能含有某些植物來源成分，而后者*由化學(xué)成分明確的組分組成。

其中，無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基是目前在生物制藥行業(yè)中應(yīng)用*泛的，它提高了細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量，避免了使用血清帶來的麻煩。目前，已有多種無血清培養(yǎng)基上市，如雜交瘤細(xì)胞無血清培養(yǎng)基、CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基、Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基和NS0 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基等。無血清培養(yǎng)基通常添加生長附加成分，如激素與生長因子、低分子營養(yǎng)成分和轉(zhuǎn)鐵蛋白等促細(xì)胞生長的附加成分，一般包括胰島素、孕酮、腐胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。

細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分03

細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加一定量的血清使細(xì)胞生長和繁殖。

氨基酸：組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同的細(xì)胞對氨基酸的需求各異，但幾種必需氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，如組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來。絕大部分細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，因?yàn)楣劝滨０肥亲鳛槟茉醇疤荚次镔|(zhì)同時被細(xì)胞利用，是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡，所以各種培養(yǎng)液中都含有較多的谷氨酰胺。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。

維生素：維持細(xì)胞生長的一種生物活性物質(zhì)，對細(xì)胞代謝有重大作用。它們在細(xì)胞中大多形成酶的輔基或輔酶，沒有它們，酶便沒有活性，代謝活動將無法進(jìn)行。維生素分為水溶和脂溶兩大類，培養(yǎng)液中直接采用ATP和輔酶。

葡萄糖：大部分培養(yǎng)基都以葡萄糖作為能量來源之一。

無機(jī)鹽：維持培養(yǎng)基滲透壓平衡，參與細(xì)胞的代謝活動。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+ 等。Na+是細(xì)胞外液中最主要的陽離子，對維持滲透壓的恒定有決定性的作用。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液，細(xì)胞內(nèi)K+對于激活某些酶是必需的，并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細(xì)胞外液中的作用是將組織內(nèi)部細(xì)胞之間相互粘著，在細(xì)胞內(nèi)參與許多重要的細(xì)胞生理活動，如傳導(dǎo)、參與肌肉細(xì)胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時，為了減少細(xì)胞的聚集和附著，要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細(xì)胞間質(zhì)的重要成分，對于細(xì)胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義。磷的化合物對細(xì)胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。

其他成分：表皮生長因子、胰島素、多肽、核苷、嘌呤等?？蓭椭?xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長。

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