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細(xì)胞培養(yǎng)基介紹

更新時間:2022-07-14點擊次數(shù):2552

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細(xì)胞培養(yǎng)基的概念 01

細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,并提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ),它為動物細(xì)胞的健康快速成長提供營養(yǎng)物質(zhì)。所以,只要用到細(xì)胞進行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造,就勢必少不了細(xì)胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基,英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時,傾向性地稱為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補加血清、抗生素等成分。



細(xì)胞培養(yǎng)基的分類02

培養(yǎng)基主要有:天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。


天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們早期采用的細(xì)胞培養(yǎng)基,直接取自于動物組織提取液或體液,如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。營養(yǎng)價值高,但成分復(fù)雜,差異大、不穩(wěn)定,來源也受限制。水解乳蛋白和膠原是兩種較好的天然培養(yǎng)基,富含氨基酸。血清是天然培養(yǎng)基中有效和常用的培養(yǎng)基,但其組成成分復(fù)雜,其中一些成分與功能不明確。血清的來源有胎牛血清、小牛或成牛血清、馬血清、雞血清、羊血清及人血清,*泛應(yīng)用的為胎牛血清和小牛血清。


合成細(xì)胞培養(yǎng)基是用化學(xué)成分明確的試劑配制的培養(yǎng)基,組分穩(wěn)定,主要包括糖類、必需氨基酸、維生素、無機鹽類等。1950年,Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液,即M199培養(yǎng)基,可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞。1951年,Harry Eagle研發(fā)了動物細(xì)胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基,即必需培養(yǎng)基(MEM培養(yǎng)基),是目前使用*泛的合成細(xì)胞培養(yǎng)基之一。合成細(xì)胞培養(yǎng)基發(fā)展至今已有幾十種,除了沿用半個世紀(jì)的基礎(chǔ)合成細(xì)胞培養(yǎng)基之外,近年來還出現(xiàn)了營養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基。


在細(xì)胞培養(yǎng)中,需要根據(jù)細(xì)胞種類和培養(yǎng)條件的不同選擇合適的合成細(xì)胞培養(yǎng)基。目前,在動物細(xì)胞培養(yǎng)中常用基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基有BME、MEM、DMEM、RPMI-1640、Ham F12、M199 等。由于天然培養(yǎng)基的一些營養(yǎng)成分不能被合成細(xì)胞培養(yǎng)基*代替,因此一般需在合成細(xì)胞培養(yǎng)基中添加5%~10%的胎牛血清。胎牛血清的加入對細(xì)胞培養(yǎng)非常有效,但胎牛血清的成分復(fù)雜,這對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、純化和檢測會帶來一定的不便,為減少胎牛血清的影響,開發(fā)了營養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基,可以將胎牛血清的使用量降低到1~3%。


無血清細(xì)胞培養(yǎng)基(serum free medium, SFM)是指在使用中無需添加血清的細(xì)胞培養(yǎng)基,且其組成成分不含有任何動物組分。按照其組分分類,還可以分為無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基和化學(xué)限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基,前者組分中可能含有某些植物來源成分,而后者*由化學(xué)成分明確的組分組成。


其中,無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基是目前在生物制藥行業(yè)中應(yīng)用*泛的,它提高了細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量,避免了使用血清帶來的麻煩。目前,已有多種無血清培養(yǎng)基上市,如雜交瘤細(xì)胞無血清培養(yǎng)基、CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基、Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基和NS0 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基等。無血清培養(yǎng)基通常添加生長附加成分,如激素與生長因子、低分子營養(yǎng)成分和轉(zhuǎn)鐵蛋白等促細(xì)胞生長的附加成分,一般包括胰島素、孕酮、腐胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。



細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分03

細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加一定量的血清使細(xì)胞生長和繁殖。


氨基酸:組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同的細(xì)胞對氨基酸的需求各異,但幾種必需氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,如組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸,細(xì)胞可以自己合成,或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來。絕大部分細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求,因為谷氨酰胺是作為能源及碳源物質(zhì)同時被細(xì)胞利用,是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時,細(xì)胞生長不良而死亡,所以各種培養(yǎng)液中都含有較多的谷氨酰胺。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體,D型氨基酸不能被利用。


維生素:維持細(xì)胞生長的一種生物活性物質(zhì),對細(xì)胞代謝有重大作用。它們在細(xì)胞中大多形成酶的輔基或輔酶,沒有它們,酶便沒有活性,代謝活動將無法進行。維生素分為水溶和脂溶兩大類,培養(yǎng)液中直接采用ATP和輔酶。


葡萄糖:大部分培養(yǎng)基都以葡萄糖作為能量來源之一。


無機鹽:維持培養(yǎng)基滲透壓平衡,參與細(xì)胞的代謝活動。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+ 等。Na+是細(xì)胞外液中最主要的陽離子,對維持滲透壓的恒定有決定性的作用。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,細(xì)胞內(nèi)K+對于激活某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細(xì)胞外液中的作用是將組織內(nèi)部細(xì)胞之間相互粘著,在細(xì)胞內(nèi)參與許多重要的細(xì)胞生理活動,如傳導(dǎo)、參與肌肉細(xì)胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時,為了減少細(xì)胞的聚集和附著,要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細(xì)胞間質(zhì)的重要成分,對于細(xì)胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義。磷的化合物對細(xì)胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。


其他成分:表皮生長因子、胰島素、多肽、核苷、嘌呤等??蓭椭?xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長。


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