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標(biāo)記細(xì)胞株要如何保存?

更新時(shí)間:2022-08-09點(diǎn)擊次數(shù):1274
  細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱為有限細(xì)胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng),則稱為連續(xù)細(xì)胞系,培養(yǎng)50代以上并無(wú)限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來(lái)講,可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
  
 

標(biāo)記細(xì)胞株
 

 

  標(biāo)記細(xì)胞株是在細(xì)胞系中穩(wěn)轉(zhuǎn)特定的標(biāo)簽(LUC、GFP、RFP等),此細(xì)胞株可以作為示蹤工具細(xì)胞,為細(xì)胞成像以及活體成像提供便利。細(xì)胞株要如何存儲(chǔ)?
  
  1、紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈,開啟超凈臺(tái)正常工作狀態(tài),用酒精消毒操作者的雙手。
  
  2、將所需的培養(yǎng)基,胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺(tái)面內(nèi),點(diǎn)燃酒精燈,將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后,再將瓶口對(duì)準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次,旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋,分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上,瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈,且放在距離酒精燈zui近的位置,瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。
  
  3、將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次,旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次,蓋放于酒精燈右側(cè)后將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液懸空倒進(jìn)污缸,在酒精燈消毒2-3次瓶口,豎直放好。取1ml移液器快速移動(dòng)在酒精燈上消毒1-2次,然后再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液,懸空移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
  
  4、將培養(yǎng)使胰酶浸沒(méi)整個(gè)瓶壁的細(xì)胞層,計(jì)時(shí)約40s,立馬豎起對(duì)著燈光可觀察到細(xì)胞與細(xì)胞之間有針孔樣縫隙,并有1-2個(gè)細(xì)胞脫落,這時(shí)為胰酶消化的時(shí)機(jī)。若看到成片的細(xì)胞從瓶壁脫落為胰酶消化過(guò)度;若看不到針孔樣縫隙和細(xì)胞脫落,則需繼續(xù)消化,輕輕的迅速平放培養(yǎng)瓶使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞層1s后迅速豎起對(duì)著燈光觀察細(xì)胞情況,可反復(fù)幾次,直至出現(xiàn)針孔樣縫隙和1-2個(gè)細(xì)胞脫落的消化狀態(tài),用移液器將胰酶吸凈。
  
  5、吸取1ml細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),并用移液器吸取少量的培養(yǎng)基輕柔的反復(fù)沖洗培養(yǎng)瓶壁5-8次,使貼壁細(xì)胞*脫落于培養(yǎng)基內(nèi)再輕輕吹打2-3次,使細(xì)胞盡可能處于單個(gè)懸浮狀態(tài)。
  
  6、將1ml含有標(biāo)記細(xì)胞株的凍存液移入新的保種管內(nèi),擰緊瓶蓋,做好實(shí)驗(yàn)標(biāo)記。
  
  7、將培養(yǎng)基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊,熄滅酒精燈,整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面,取出實(shí)驗(yàn)試劑及污缸等,關(guān)閉超凈工作臺(tái)。
  
  8、將保種管先放于4℃冰箱30min后拿出放置-20℃冰箱過(guò),次日再放于-80℃的冰箱內(nèi)3-4天,存放于-196℃的液氮灌內(nèi)長(zhǎng)期保存。
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