技術(shù)文章
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細(xì)胞培養(yǎng)基的概念01細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,并提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ),它為動(dòng)物細(xì)胞的健康快速成長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。所以,只要用到細(xì)胞進(jìn)行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造,就勢(shì)必少不了細(xì)胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基,英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí),傾向性地稱(chēng)為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,多稱(chēng)為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補(bǔ)加血清、抗生素等成分。細(xì)胞培養(yǎng)基的分類(lèi)02培養(yǎng)基主要有:天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。天然...
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實(shí)驗(yàn)方法1.將實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死,75%乙醇浸泡5min,固定,備皮,取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細(xì)剝離脂肪,血管等多余組織,PBS清洗,加胰酶消化1h。3.分離真表皮,去除表皮后,PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎,加入適量胰酶,轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi),37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結(jié)束后,加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應(yīng),1000rpm離心5min,棄上清。6.PBS清洗一遍,離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi),加入2ml*...
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外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,細(xì)胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進(jìn)行分離,提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心,以及后來(lái)發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細(xì)胞外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題:1、培養(yǎng)細(xì)胞...
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1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min,開(kāi)胸,取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過(guò)的D-HANKS中漂洗兩遍,移入超凈臺(tái)。2.仔細(xì)剪除大血管,左右心房及右心室和室間隔,保留左心室,去除內(nèi)、外膜,PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3,滴加1ml胎牛血清,均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi),組織塊間隔1-2mm,放入5%CO2,37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時(shí)后去除培養(yǎng)皿,加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時(shí)后可見(jiàn)...
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一.實(shí)驗(yàn)方法1.多聚賴(lài)氨酸(Poly-D-Lysine)包被培養(yǎng)板的制備:原代分離進(jìn)行前一天,用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴(lài)氨酸工作液,0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,于超凈工作臺(tái)內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi),確保覆蓋板底,靜置孵育30min后吸出(可回收反復(fù)使用2-3次),用無(wú)菌水清洗培養(yǎng)板,置于超凈臺(tái)內(nèi)晾干,照紫外過(guò)夜。2.次日,取出生24h以?xún)?nèi)的SD大鼠,75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇,迅速斷頭,浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...
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研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的,我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而,這些細(xì)胞系往往因長(zhǎng)期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性,對(duì)藥物治療的反應(yīng)差距越來(lái)越大。因此,越來(lái)越多的人選擇原代細(xì)胞。來(lái)源于胚胎、組織、器官和外周血,經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng),也稱(chēng)為原代培養(yǎng),是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性的細(xì)胞,適用于藥敏試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法?1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見(jiàn)、簡(jiǎn)...
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充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類(lèi)具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來(lái)源的分類(lèi),干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中,胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性,是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而,關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭(zhēng)議。與胚胎干細(xì)胞相比,成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險(xiǎn)低、無(wú)倫理爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)。因此,成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對(duì)象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中,充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來(lái)源于中胚層的成體干細(xì)胞,具有自我更新和多向分化的潛能。間...
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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?1、組織塊培養(yǎng)法(1)接種后的前3天,觀察和移動(dòng)時(shí)注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動(dòng),否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。(2)加入的培養(yǎng)基不宜過(guò)多,以免浸泡的組織因輕微波動(dòng)而脫落。(3)細(xì)胞向外遷移時(shí),注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。(4)為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上,可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞(1)原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時(shí),...
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