原代細胞分離培養(yǎng)中的注意事項

原代培養(yǎng)的細胞，來源于胚胎、組織器官和外周血，通過特殊的分離方法制備，稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內(nèi)細胞相似的生物學(xué)特性，是研究生進行與物體相關(guān)的生命活動的理想材料。原代細胞分離培養(yǎng)是從體內(nèi)取出人/小鼠模型動物特異性細胞，用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理，分散成單細胞，并在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得細胞能夠存活、生長和繁殖的過程。原代培養(yǎng)是指細胞、組織和器官直接從體內(nèi)取出后立即進行培養(yǎng)。此時的細胞保持了原細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，則仍保留二倍體數(shù)。但實際上，...

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原代心肌細胞間的培養(yǎng)都有哪些抗污染措施？

成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細胞間中仍有少數(shù)成纖維細胞混雜，如果處理不當(dāng)，很容易長成優(yōu)勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂，因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細胞。觀察原代心肌細胞間形態(tài)時，接種密度低，貼壁心肌細胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄，...

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細胞外泌體的組成都包括什么？

細胞外泌體是細胞分泌的大小約為30-150nm的納米物質(zhì)，是細胞外囊泡的一類，結(jié)構(gòu)類似于細胞，磷脂雙分子層表面具有多種特異性膜蛋白，內(nèi)部搭載著多種蛋白質(zhì)、RNA、DNA等重要生物信號物質(zhì)，廣泛分布于血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、膽汁等各種體液中。外泌體的來源細胞種類非常豐富，幾乎在人體血液、尿液、母乳和唾液等多種體液中都能發(fā)現(xiàn)它的蹤跡。可傳遞包括DNA、RNA、miRNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)在內(nèi)的多種生物活性物質(zhì)，同時保護包裹的內(nèi)含物免受核酸酶和蛋白酶，以及外界壞境變化引起的降解...

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細胞增殖分析（CCK-8 法）

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點缺點CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復(fù)性好價格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價格便宜操作步驟較多，需要使用有機試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測時間長，細胞毒性較高一、原理：CCK-8是MTT的升級產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧...

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從肝臟組織中制備細胞核

一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實驗步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細胞標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...

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從哺乳動物細胞或組織分離DNA

材料與儀器：細胞、TBS抽提緩沖液、離心管實驗步驟：步驟1：根據(jù)樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進行操作。(1)細胞樣品①單層培養(yǎng)的細胞以用冰預(yù)冷的TBS將單層細胞洗滌2次，用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS中，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養(yǎng)皿，并入離心管中的細胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細胞。用5~10倍體積經(jīng)冰預(yù)冷的TBS重懸細胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細胞，使細胞密度為5x107細胞/ml，轉(zhuǎn)移至一個三角燒瓶中...

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細胞凍存和復(fù)蘇實驗

實驗方法原理：細胞凍存和復(fù)蘇的基本原理是慢凍快解凍，已被證明能最大限度地提高細胞活力。目前常用甘油或二甲基亞砜作為細胞低溫保存的保護劑。這兩種物質(zhì)可以提高細胞膜對水的滲透性，再加上緩慢的冷凍可以使細胞內(nèi)的水從細胞中滲出，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶形成對細胞的損傷。復(fù)蘇細胞時應(yīng)采用快速熔融的方法，以保證細胞外晶體在短時間內(nèi)熔融，以避免因水緩慢熔融進入細胞形成細胞內(nèi)重結(jié)晶而對細胞造成損傷。實驗材料：細胞試劑、試劑盒：D-Hanks液、小牛血清、培養(yǎng)液、青霉素、鏈霉素、胰蛋...

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標(biāo)記細胞株要如何保存？

細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間...

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